Hoe een bacteriecultuur te bevriezen-drogen (lyofilisatie)

Lyofilisatie of vriesdrogen is een korte laboratoriumprocedure

Vriesdrogen, ook lyofilisatie of cryodetectie genoemd, is het proces waarbij water uit een product wordt verwijderd nadat het is bevroren (en vervolgens onder vacuüm is geplaatst) waardoor ijs kan veranderen van een vaste stof in een damp, zonder door een vloeibare fase te gaan. IJs (of andere bevroren oplosmiddelen) worden door sublimatie uit een product verwijderd en gebonden watermoleculen worden verwijderd door het desorptieproces.

De grondbeginselen van de lyofilisatie

Een van de beste manieren om een ​​bacterie-, schimmel-, gist- of andere cultuur van micro-organismen voor lange tijd op te slaan, is door gebruik te maken van het proces van vriesdrogen. Deze korte laboratoriumprocedure kan worden uitgevoerd met elke commercieel verkrijgbare vriesdroger die uw kweekcollectie behoudt. Omdat lyofilisatie de meest complexe en dure vorm van drogen is, is het proces meestal beperkt tot delicate, hittegevoelige materialen van hoge waarde. Stoffen die niet door bevriezing zijn beschadigd, kunnen meestal worden gelyofiliseerd, zodat gekoelde opslag niet nodig is.

Dit proces kan slechts drie uur duren, en wel 24 uur, exclusief de tijd voor het groeien van de cultuur.

Het stapsgewijze proces van lyofilisatie

1. Ten eerste, kweek een kweek gedurende de nacht, of gazon, van het micro-organisme op LB of een andere geschikte voedingsagarplaat.

2. Maak vervolgens steriele crimp-cap flesjes door het autoclaveren van tevoren, met de doppen (rubberen stoppen) losjes bovenop geplaatst. Plaats papieren etiketten met de identificatie van de cultuur in de buizen vóór het autoclaveren. U kunt ook buizen gebruiken met doppen die zijn ontworpen voor steriliteit .

1. Voeg 4 ml lyofilisatiebuffer toe aan de plaat. Indien nodig kunnen de cellen worden opgehangen met een steriele glazen staaf.

2. Breng de kweeksuspensie snel over naar de gesteriliseerde flesjes. Voeg ongeveer 1,5 ml per injectieflacon toe. Verzegel met de rubberen dop.

3. Bevries de kweeksuspensie in de injectieflacons door de injectieflacons in een vriezer van -20 graden Celsius te plaatsen.

1. Zodra de culturen zijn bevroren, bereidt u de vriesdroger voor door hem aan te zetten en laat u de tijd om de juiste temperatuur en vacuümcondities te stabiliseren. Doe dit volgens de instructies van de fabrikant voor het specifieke merk vriesdroger dat u gebruikt.

2. Plaats de dopjes voorzichtig en aseptisch losjes bovenop de injectieflacons, zodat vocht kan ontsnappen tijdens het vriesdroogproces en plaats de injectieflacons in een vriesdroogkamer. Breng het vacuüm aan op de kamer volgens de instructies van de fabrikant.

3. Laat de kweektijd volledig lyofiliseren (uitdrogen). Dit kan een paar uur tot een nacht duren, afhankelijk van het volume van elk monster en het aantal monsters dat u hebt.

4. Verwijder de monsters uit de vriesdrogerkamer volgens de instructies van de fabrikant en sluit de injectieflacons onmiddellijk af met de rubberen doppen en vervolgens de krimptoppen.

5. Bewaar de gelyofiliseerde kweekverzameling bij kamertemperatuur.

Producten die u nodig hebt

• Vriesdroger
• Voedingsstof of andere geschikte agarplaten (en incubator om kweek te kweken)
• Glazen staaf
• Lyofilisatiebuffer
• Crimp-top flesjes met rubberen stoppers (en een crimper om de doppen aan te brengen)
• Diepvries

<sub>Referentie:

SP Scientific. Basisprincipes van bevriezen drogen. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>