Deze buffer wordt gebruikt om de DNA-beweging te bestuderen
Deze buffer heeft een lage ionsterkte en een lage buffercapaciteit. Het is het best geschikt voor elektroforese van grote (> 20 kb) stukjes DNA en zal vaak moeten worden vervangen of worden gerecirculeerd gedurende langere (> 4 h) gellooptijden.
Met dat in gedachten, wil je misschien verschillende batches van de buffer overwegen.
Aangezien de buffer eenvoudig te maken is en de stappen snel kunnen worden uitgevoerd, zou het niet bijzonder tijdrovend of moeilijk zijn om meer dan één batch tegelijk te maken. Met behulp van de onderstaande instructies duurt het slechts 30 minuten om de TAE-buffer te maken. Hier is hoe:
Bereid een voorraadoplossing van EDTA voor
Een EDTA (ethyleendiaminetetra-azijnzuur) -oplossing wordt van tevoren klaargemaakt. EDTA zal niet volledig in een oplossing gaan totdat de pH is ingesteld op ongeveer 8,0. Voor een 500 milliliter voorraadoplossing van 0,5 M EDTA, weeg 93,05 gram EDTA-dinatriumzout (FW = 372,2). Los op in 400 milliliter gedeïoniseerd water en pas de pH aan met natriumhydroxide (NaOH). Vul de oplossing aan tot een eindvolume van 500 milliliter.
Whip Up a Stock Oplossing van TAE
Maak een geconcentreerde (50x) stockoplossing van TAE door 242 gram Tris-base (FW = 121.14) weg te wegen en het op te lossen in ongeveer 750 milliliter gedeïoniseerd water.
Voeg voorzichtig 57,1 milliliter glaciaal zuur en 100 milliliter 0,5 M EDTA (pH 8,0) toe. Pas daarna de oplossing aan tot een eindvolume van 1 liter. Deze stamoplossing kan bij kamertemperatuur worden bewaard. De pH van deze buffer is niet aangepast en zou ongeveer 8,5 moeten zijn.
Bereid een werkende oplossing van TAE voor
De werkoplossing van 1x TAE-buffer wordt gemaakt door de voorraadoplossing eenvoudigweg 50 x te verdunnen in gedeïoniseerd water.
De uiteindelijke oplossingsconcentraties zijn 40 mM. Tris-acetaat en 1 mM EDTA. De buffer is nu klaar voor gebruik bij het uitvoeren van een agarosegel.
Wat je nodig hebt voor de buffer
Omdat het maken van de TAE-buffer slechts een snelle en eenvoudige set instructies vereist, is het aantal materialen dat daarvoor nodig is niet overdreven. Je hebt alleen EDTA-dinatriumzout, Tris-base en ijsazijn nodig.
Het maken van de buffer vereist ook een pH-meter en kalibratiestandaarden. Je hebt ook bekers of flacons van 600 milliliter en 1500 ml nodig, evenals cilindrische cilinders. Ten slotte heb je gedeïoniseerd water, roerstaven en roerplaten nodig.
Afsluiten
Waar wilt u de buffer maken - op een schoolsite, op een werklocatie of op een andere locatie, zoals uw huis? Controleer de inventaris voordat u begint om te controleren of u alle bovengenoemde materialen voor de TAE-buffer hebt.
Als u liever niet hoeft te betalen voor materialen, is het aan te bevelen om de buffer buiten uw huis te gebruiken. U kunt het materiaal dat u online nodig hebt gemakkelijk bestellen of een speciaalzaak voor hen bezoeken.