Deze buffer wordt gebruikt voor de scheiding van DNA van elektroforese
TBE-buffer is bijzonder nuttig voor het scheiden van kleinere DNA-fragmenten (MW <1000), zoals kleine producten van digesties met restrictie-enzymen .
TBE heeft een grotere buffercapaciteit en geeft een scherpere resolutie dan TAE-buffer . TAE-buffer is een oplossing die bestaat uit Tris-base, azijnzuur en EDTA (Tris-acetaat-EDTA).
TBE is in het algemeen duurder dan TAE en remt DNA-ligase, wat problemen kan veroorzaken als eropvolgende DNA-zuivering en ligatiestappen zijn bedoeld. Met de drie eenvoudige stappen die volgen, leer je hoe je een TBE-buffer maakt. Het duurt niet meer dan ongeveer 30 minuten om deze buffer te maken. Hier is hoe:
Bereid een voorraadoplossing van EDTA voor
Een EDTA (ethyleendiaminetetra-azijnzuur) -oplossing moet van tevoren worden klaargemaakt. EDTA zal niet volledig in oplossing gaan totdat de pH is ingesteld op ongeveer 8,0. Voor een 500 milliliter voorraadoplossing van 0,5 M EDTA, weeg 93,05 gram EDTA-dinatriumzout (FW = 372,2). Los het vervolgens op in 400 milliliter gedeïoniseerd water en stel de pH in met NaOH. Vul daarna de oplossing bij tot een eindvolume van 500 milliliter.
Bereid een voorraadoplossing van TBE voor
Maak een geconcentreerde (5x) voorraadoplossing van TBE door 54 g Tris-base (FW = 121,14) en 27,5 g boorzuur (FW = 61,83) te wegen en beide op te lossen in ongeveer 900 milliliter gedeïoniseerd water. Voeg vervolgens 20 milliliter 0,5 M EDTA (pH 8,0) toe en stel de oplossing in op een eindvolume van 1 liter.
Deze oplossing kan bij kamertemperatuur worden bewaard, maar in oudere oplossingen zal zich een neerslag vormen. Bewaar de buffer in glazen flessen en gooi weg als zich een neerslag heeft gevormd.
Bereid een werkende oplossing van TBE voor
Voor agarosegelelektroforese kan een TBE-buffer worden gebruikt in een concentratie van 0,5x (1:10 verdunning van de geconcentreerde voorraad). Verdun de voorraadoplossing met 10x in gedeïoniseerd water. De uiteindelijke opgeloste concentraties zijn 45 mM Tris-boraat en 1 mM EDTA. De buffer is nu klaar voor gebruik bij het uitvoeren van een agarosegel .
Wat je nodig hebt
Om TBE-buffer te maken, hebt u slechts vier stoffen nodig. De overige items in deze lijst zijn apparatuur. De vier benodigde stoffen zijn EDTA-dinatriumzout, Tris-base, boorzuur en gedeïoniseerd water.
Wat apparatuur betreft, hebt u een pH-meter en kalibratiestandaarden nodig. Daarnaast heeft u 600-milliliter en 1500-milliliter bekers of flacons nodig. Uw behoeften aan uitrustingen zijn afgerond met gegradueerde cilinders en roerstaven en roerplaten.
Controleer de inventaris in het laboratorium dat u gaat gebruiken om ervoor te zorgen dat u alles heeft wat u nodig heeft voordat u aan de slag gaat. Niets is erger dan te moeten stoppen midden in het voorbereiden van een oplossing omdat je geen goede materialen meer hebt.
Als uw lab op school is of op uw werklocatie, neemt u contact op met het juiste personeel om te controleren of ze alle items in de stock hebben. Als u dit wel doet, bespaart u mogelijk tijd en energie.