Natriumcitraatbuffer wordt gebruikt voor RNA-isolatie omdat het de basehydrolyse van de RNA-strengen minimaliseert. Dit maakt het een belangrijke stap in de mRNA-zuivering tijdens genoomonderzoek of voor het bestuderen van transcriptie.
Op citraat gebaseerde buffers kunnen ook de detectie van antigenen in preparaten van vast weefsel ondersteunen, omdat ze de dwarsverbindingen tussen de antigenen en de fixatiemedia verbreken.
Maak met de onderstaande gids een natriumcitraatbuffer met pH 6. De instructies zijn niet alleen gemakkelijk maar ook snel uit te voeren. Het duurt slechts ongeveer 10 minuten om deze stappen te voltooien.
Twee opties om de buffer te maken
Er zijn twee manieren om een natriumcitraatbuffer te maken. Bepaal eerst of je zowel citroenzuur als de geconjugeerde base, natriumcitraat, hebt om mee te werken. Als je alleen citroenzuur hebt, is het geen probleem. Je kunt nog steeds de buffer maken.
Aan de andere kant, als u zowel het zuur als de base hebt, maakt u een voorraadoplossing van elk. Meng 21 gram citroenzuur in 1 liter gedestilleerd water en 29,4 gram natriumcitraat in 1 liter gedestilleerd water.
Als je alleen citroenzuur hebt, meng dan 2,1 gram in iets minder dan 1 liter gedestilleerd water en ga verder met de volgende stap.
Citroenzuur en natriumcitraatoplossingen mengen
Nu u uw voorraadoplossing hebt gemaakt (als u zowel een zuur als een basis had) of uw zuur hebt gemengd in gedestilleerd water (als u dat niet deed), kunt u zich concentreren op uw oplossingen.
Meng 82 milliliter van de citroenzuuroplossing met 18 milliliter van de natriumcitraatoplossing.
Maak vervolgens het totale volume van het mengsel tot iets minder dan 1 liter met gedestilleerd water. Laat voldoende volume om de toevoeging van natriumhydroxide (NaOH) in de volgende stap mogelijk te maken.
Aanpassen van de pH
Terwijl u de oplossing voorzichtig roert met een magnetische roerder, gebruikt u 1M natriumhydroxide om de pH van het mengsel in te stellen op 6,0. Maak daarna het eindvolume van de oplossing tot 1 liter met gedestilleerd water met behulp van een maatkolf.
Wat u nodig hebt om de buffer te maken
Niet alleen duurt het niet lang voordat je de natriumcitraatbuffer maakt, je zult ook niet veel materialen nodig hebben. Met citroenzuur, 1 M natriumhydroxide, gedestilleerd water en een gekalibreerde pH-probe ben je al halverwege. Het gebruik van natriumcitraat is optioneel.
Voor het maken van de buffer zijn ook een maatcilinder van 1 liter, een maatkolf van 1 liter en drie mediabakken van 1 liter vereist. Ten slotte heb je een magnetische roerstaaf en een magneetroerder nodig.
Als u niet over al deze materialen beschikt, kunt u overwegen het lab te gebruiken op uw school of op de werkplek, zodat u ze niet zelf hoeft te kopen. U kunt dit materiaal ook eenvoudig online kopen of een winkel met speciaalzaken in uw regio bezoeken.