Hoe deze immunohistochemische kleuringsbuffer te maken
Fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) is een bufferoplossing die gewoonlijk wordt gebruikt voor immunohistochemische (IHC) kleuring en wordt vaak gebruikt in biologisch onderzoek. PBS is een op water gebaseerde zoutoplossing die natriumwaterstoffosfaat, natriumchloride en, in sommige gevallen, kaliumchloride en kaliumdiwaterstoffosfaat bevat.
Immunohistochemische kleuring
Immunohistochemie verwijst naar het proces van het detecteren van antigenen zoals eiwitten in de cellen van een weefselsectie met behulp van het principe van antilichamen die specifiek binden aan antigenen in biologische weefsels.
Immunofluorescentiekleuring was de eerste immunohistochemische kleuringsmethode.
Antigenen worden zichtbaar wanneer geconjugeerd met antilichamen met behulp van fluorescentiekleurstoffen als gevolg van een antigeen-antilichaambindingsreactie. Dit proces vindt plaats wanneer het wordt geactiveerd door opwindend licht met een specifieke golflengte onder een fluorescentiemicroscoop.
De osmolariteit en ionconcentraties van de oplossingen komen overeen met die van het menselijk lichaam - ze zijn isotoon.
Een recept voor PBS
U kunt PBS op verschillende manieren bereiden. Er zijn meerdere formules. Sommigen bevatten geen kalium, terwijl anderen calcium of magnesium bevatten.
Dit recept is relatief eenvoudig. Het is voor 10X PBS-voorraadoplossing (0,1 M). U kunt echter ook een 1X-voorraadoplossing maken, of beginnen met dit 10X-recept en dit verdunnen tot 1X.
Het hele proces duurt ongeveer 10 minuten.
Er is ook een optie om Tween toe te voegen.
Wat u nodig hebt om PBS-buffer te maken
- Natriumfosfaat monobasisch (watervrij)
- Natriumfosfaat dibasisch (watervrij)
- Natriumchloride
- Schaal en weeg boten
- Magneetroerder en roerstaaf
- Een pH-probe die is gekalibreerd en geschikte oplossingen voor het aanpassen van de pH
- 1L maatkolf
- Tween 20 (optioneel)
Hoe fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) te maken
Weeg 10,9 g watervrij dibasisch natriumfosfaat (Na2HPO4), 3,2 g watervrij natriumfosfaat monobasisch (NaH2PO4) en 90 g natriumchloride (NaCl) af.
Los op in minder dan 1 liter gedestilleerd water.
Stel de pH in op 7,4 en maak de oplossing tot een eindvolume van 1L.
Verdun 10X vóór gebruik en stel zonodig de pH bij.
U kunt een PBS-oplossing met 0,5 procent Tween 20 maken door 5 ml Tween 20 toe te voegen aan de 1L-oplossing.
Tips voor het maken van PBS-buffer
Bewaar de buffer op kamertemperatuur nadat u de PBS-oplossing hebt gemaakt.
Niet-watervrije reagentia kunnen worden vervangen, maar je moet de juiste massa van elk herberekenen om de toegevoegde watermoleculen te herbergen.
Gebruik van fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS)
Fosfaatgebufferde zoutoplossing heeft veel toepassingen omdat het isotoon en niet-toxisch voor de meeste cellen is. Het kan worden gebruikt om stoffen te verdunnen en het wordt vaak gebruikt om containers met cellen te spoelen. PBS kan worden gebruikt als een verdunningsmiddel in verschillende methoden om biomoleculen te drogen, omdat de watermoleculen daarbinnen bijvoorbeeld rond het stof-eiwit zullen worden gestructureerd. Het wordt "gedroogd" en geïmmobiliseerd op een stevig oppervlak.
De pH blijft stabiel en consistent om de vernietiging van cellen te voorkomen.
De dunne waterfilm die zich aan de stof bindt, voorkomt denaturatie of andere conformationele veranderingen. Carbonaatbuffers kunnen voor hetzelfde doel worden gebruikt, maar met minder effectiviteit.
PBS kan ook worden gebruikt om een referentiespectrum te nemen bij het meten van de eiwitadsorptie in ellipsometrie.