Ook wel RFLP-analyse genoemd, de techniek maakt gebruik van de polymorfismen in de genetische codes van individuele mensen. Hoewel alle leden van een soort in wezen dezelfde genetische samenstelling hebben, houden deze kleine verschillen rekening met variaties in fenotype, zoals uiterlijk of metabolisme, tussen individuen.
RFLP: analysetechniek en toepassingen
RFLP-analysetechniek omvat het knippen van een bepaald gebied van DNA met bekende variabiliteit, met restrictie-enzymen, vervolgens het scheiden van de DNA-fragmenten door agarosegelelektroforese en het bepalen van het aantal fragmenten en relatieve grootten.
Een restrictie-enzym is een enzym, een eiwitmolecuul, dat DNA knipt op restrictieplaatsen. In wezen wordt het DNA-monster afgebroken en verteerd door de restrictie-enzymen. De resulterende fragmenten worden gescheiden volgens hun lengtes en het patroon van fragmentgroottes zal voor elk getest individu verschillen.
Het volledige RFLP-proces vereist probe-labeling, DNA-fragmentatie, elektroforese, blotting, hybridisatie, wassen en autoradiografie. De gedetecteerde RFLP wordt gevisualiseerd met behulp van röntgenfilm in een autoradiografie, waar DNA-fragmenten kunnen worden bekeken en geanalyseerd nadat ze van elkaar zijn gescheiden door elektroforese.
Sommige van de toepassingen voor RFLP-analyse omvatten:
- DNA-vingerafdrukken . Forensische wetenschappers kunnen RFLP-analyse gebruiken om verdachten te identificeren op basis van bewijsmateriaal dat is verzameld bij scènes van misdaden.
- Vaderschap. RFLP wordt ook gebruikt bij de bepaling van het vaderschap of voor het opsporen van voorouders.
- Genetische diversiteit. De techniek kan worden gebruikt bij het bestuderen van de evolutie en migratie van dieren in het wild, het bestuderen van fokpatronen in dierpopulaties en bij het opsporen en diagnosticeren van bepaalde ziekten.
De techniek van het gebruik van RFLP-detectie van variatie in genomen is een vitaal hulpmiddel bij het in kaart brengen van genoom- en genetische ziektes. Als de locatie van een bepaald ziektegen wordt gezocht in een bepaald chromosoom, dan zouden onderzoekers het DNA van leden van een familie met de ziekte analyseren en vervolgens zoeken naar vergelijkbare overervingpatronen in RFLP-allelen.
Als een ziektegen eenmaal gelokaliseerd is, kan het uitvoeren van RFLP-analyse op andere familieleden een drager van de mutante genen onthullen of een algeheel ziekterisico signaleren. Het is belangrijk op te merken dat de RFLP-techniek niet op grote schaal wordt gebruikt nu nieuwere, meer robuuste technieken worden gebruikt voor DNA-analyse in de forensische wetenschap en verschillende andere gebieden.
Negatief aspect van de analyse
Helaas is de RFLP-analysetechniek vervelend en langzaam. Afgezien van het vereisen van een grote hoeveelheid monster-DNA - zou het monster gewoonlijk ongeveer de grootte van een kwart moeten hebben, wat relatief groot is voor DNA-monsters - het proces, van probe-labeling tot wassen en autoradiografie, kan tot een volledige maand om te voltooien.
Resultaten van het Human Genome Project hebben vrijwel de behoefte aan RFLP vervangen. Het project liet toe om de volledige sequentie van het DNA in menselijke cellen, het menselijk genoom en voor het identificeren van alle genen in het menselijk genoom te bepalen.